Международная научно-практическая конференция «Экспериментальная и клиническая фармакология» (27-28 сентября 2011 года, г. Гродно, Республика Беларусь, отв. ред. П.С.Пронько). – Гродно: ГрГМУ, 2011. – С. 95-98.

 

Разработанная в ИФБ НАН Беларуси биологически активная добавка (БАД) «МЕНТУМ®» – оригинальная фитокомпозиция c анксиолитической и хронотропными действиями, содержащая в качестве активных компонентов тонкоизмельченные  порошки корневищ с корнями валерианы (100 мг), листьев мяты (50 мг), травы мелиссы (50 мг) и травы зверобоя (50 мг). БАД «МЕНТУМ®» способствует нормализации сна, улучшает переносимость повышенных умственных нагрузок и эмоционального стресса.

Фармацевтический анализ фитокомпозиции предполагает идентифицикацию и определение количественного содержания наиболее важных биологически активных веществ (БАВ) «МЕНТУМ®»: валереновой кислоты, флавоноидов и гидроксикоричных кислот.

Валереновая кислота является весьма лабильным соединением и  малоустойчива, что затрудняет ее идентификацию. На основании литературных данных присутствие валереновой кислоты в фармпродукте оценивали методом тонкослойной  хроматографии (ТСХ) [1]. Для количественного определения флавоноидов в БАД «МЕНТУМ®» выбрана  широко распространенная методика, основанная на способности образовывать окрашенный комплекс со спиртовым раствором алюминия хлорида [2, 3]. Определение гидроксикоричных кислот в БАД  «МЕНТУМ®» проведено с использованием метода спектрофотометрии (СФ) в УФ- и видимых областях [4,5,6,7].

Целью  исследования является оценка методов СФ в УФ- и видимых областях, и ТСХ для проведения качественного и количественного анализа БАД «МЕНТУМ®».

Методы исследования. Определение БАВ проводили с помощью методик частных фармакопейных статей, представленных в Государственной Фармакопее Республики Беларусь (ГФ РБ, т. 2, разделы: «Валерианы корневища с корнями», «Зверобоя трава», «Мелиссы трава», «Мяты перечной листья» [8].

Для проведения анализа были  использованы методы  СФ и ТСХ, описанные в ГФ РБ (т. 1; п. 2.2.25; 2.2.27) [9].

Хроматографию в тонком слое сорбента осуществляли на пластинках «ALUGRAM», СФ проводили на приборе «Agilent 8453 UV-Vis».

Результаты исследования. Для идентификации валереновой кислоты в БАД «МЕНТУМ®», содержащей лекарственное растительное сырье (ЛРС) валерианы, использовали метод ТСХ (ГФ РБ , т. 1; п. 2.2.27) [9]. Содержимое капсул обрабатывали 70% спиртом, встряхивали в течение 2,5 ч и фильтровали. Полученный фильтрат наносили на ТСХ пластинку со слоем силикагеля F254.  Хроматографию осуществляли восходящим методом в слабонаклонном положении в системе растворителей ацетон-гексан (1:2). Когда фронт растворителей проходил 11 - 12 см от линии старта, пластинку вынимали из камеры, сушили на воздухе до удаления запаха растворителей и обрабатывали раствором ванилина в кислоте серной. Затем пластинку выдерживали в сушильном шкафу при температуре 80°С в течение 3-5 мин. После обработки хроматограммы реагентом была четко видна зона малинового цвета в форме «шапочки» с Rf - 0,46 - 0,54, которая соответствует валереновой кислоте [10].

Наличие БАВ мелиссы, мяты и зверобоя определяли по присутствию фенольных соединений – гидроксикоричных кислот. С учетом того, что в состав БАД входят мелисса и мята, содержащие розмариновую кислоту, для их идентификации использована методика, рекомендованная ГФ РБ (п. 2.2.25) [9]. К содержимому капсул прибавляли 70 % спирт, встряхивали 1,5 ч и фильтровали. Экстракцию повторяли еще раз в течение 30 мин, процеживая извлечение в ту же мерную колбу. 1,0 мл полученного раствора помещали в коническую колбу вместимостью 50 мл и доводили 70% спиртом до метки. Через 20 мин проводили спектрофотометрическое определение: УФ-спектр водно-спиртового извлечения содержимого капсул «МЕНТУМ®» имеет характерные максимумы поглощения при длинах волн 280 ± 5 нм и 326 ± 2 нм. При этом максимум поглощения λ max = 326 ± 2  нм соответствует розмариновой кислоте – доминирующему фенилпропаноиду мяты и мелиссы.

Для определения  суммы флавоноидов в пересчете на рутин использована методика, рекомендуемая ГФ РБ для зверобоя [8]. Метод заключается в определении продуктов реакции комплексообразования  водно – спиртового раствора с алюминия хлоридом. УФ – спектрофотометрия используется для установления свободных ОН групп, добавление алюминия хлорида сопровождается смещением максимумов поглощения, характерным для гидроксильных групп в различных положениях [3]. В качестве раствора стандартного образца (РСО) использовали рутин (Fluka, 78095), аналитическая длин волны была выбрана λ = 415 ± 2  нм.

Фармацевтический анализ БАД «МЕНТУМ®» с. 01210, 031210 непосредственно после наработки фармацевтического продукта подтвердил их соответствие требованиям ТУ BY 500043647.003-2010. Дополнительно проведен химико-фармацевтический анализ БАД «Ментум®» вышеуказанных серий со сроком хранения 0 и 3 месяцев в условиях, регламентированных НТД (в сухом месте, при температуре от 15ºС до 25ºС). По физико-химическим показателям БАД «МЕНТУМ®» с. 011210, с. 031210 соответствуют требованиям TУ BY 500043647.003-2010 (Таблица).

Таблица. Динамика содержания БАВ и активных компонентов в капсулах БАД «Ментум®»  (с. 011210, с.031210).

Показатели

Требования   TY BY

0 мес.

3 мес.

Наличие кислоты валереновой

На хроматограмме

испытуемого раствора

обнаруживается зона

малинового цвета в форме

«шапочки» с величиной Rt- 0,46 -

0,54.

Соответствует

Соответствует

Наличие флавоноидов

Обнаруживаются характерные максимумы: 280±5 нм и 326±2 нм (λmax = 326±2 нм соответствует розмариновой кислоте).

Соответствует

Соответствует

Сумма гидроксикоричных кислот в пересчете на розмариновую кислоту, мг, не менее

1,5

2,04, 2,6

2,04, 2,5

Сумма флавоноидов в пересчете на рутин, мг, не менее

1,0

5,69, 8,15

4,07, 7,34

 

Заключение. Разработаны методики определения качества многокомпонентной БАД «МЕНТУМ®» с использованием СФ в УФ- и видимой областях, и ТСХ. Оценка капсул БАД «МЕНТУМ®» по показателям: «Наличие кислоты валереновой», «Наличие флавоноидов», «Сумма гидроксикоричных кислот в пересчете на розмариновую кислоту», «Сумма флавоноидов в пересчете на рутин», подтвердила соответствие качества названного фармпродукта  требованиям НТД.

Разработанные методики включены в ТУ BY 500043647.003-2010  для определения показателей «Качественное определение» и «Количественное определение» БАД «МЕНТУМ®».

Анализ c.011210, с.021210 БАД «МЕНТУМ®», наработанных в ГП «АКАДЕМФАРМ»  со сроком хранения  0 и 3 месяцев, показал соответствие физико – химических показателей требованиям TУ BY 500043647.003-2010.

Литература:

1.       Попов Д.М., Дюкова В.В., Бакалова Д.Т. Контроль качества препаратов валерианы фотоколометрическим методом. Хим.- фарм. журнал, 1986. - № 4, - С. 464 -467.

2.       Максютина Н.П., Комиссаренко Н.Ф, Прокопенко А.П. Растительные лекарственные средства // Под ред. Н. П. Максютиной. - К.: Здоров’я, 1985. - С. 280.

3.       Пасичный В.Н. Пищевые добавки для усиления и стабилизации цвета Текст. / В. Н. Пасичный, И. В. Кремешная, П. М. Сабадаш // Ингредиенты. 2007. - № 8. - С. 10-12.

4.       Косман  В.М.,  Зенкевич  И.Г. //  Растительные  ресурсы. 2001. -  Т. 37. - С. 123–129.

5.       Запорожец О.А., Крушинская Е.А., Барвинченко В.Н. Спектрофотометрическое определение гидроксикоричной кислоты и ее производных в препаратах эхинацеи // Хим.-фармац. журнал. 2003. Т. 37. -  № 12. - С. 11-13.

6.       Косман В.М., Зенкевич И.Г. Количественное экстрационно-спектрофотометрическое определение суммарного содержания гидроксикоричных кислот в присутствии флавоноидов в экстрактивных веществах некоторых лекарственных растений // Растительные ресурсы. 2001. - № 4. С.123-129.

7.       Куркин В.А., Авдеева О.И., Авлеева Е.В., Мизина П.Г. Количественное определение суммы гидроксикоричных кислот в надземной части Echinacea purpurea (L.) Moench // Растительные ресурсы. 1998. -  Т. 34, вып. 2. - С. 81-85.

8.       Государственная Фармакопея Республики Беларусь // Ред. Шеряков А.А. Молодечно. 2008.- Т. 2.

9.       Государственная Фармакопея Республики Беларусь // Ред. Шеряков А.А. Молодечно. 2008.- Т. 1.

10.  Дунец Л. Н., Цвилик Г. Л., Погирницкая А. В., Петров П. Т. Определение показателя качества «Подлинность» в процессе стандартизации многокомпонентных лекарственных фитопрепаратов // Молекулярно-биологические и физико-химические методы идентификации биологических объектов и материалов различного происхождения. Материалы ІІ Республиканской  научно-практической конференции. - Минск. - 2003. - С. 174180.

 

 

USE OF SPECTROPHOTOMETERУ AND TLC IN THE ANALYSIS OF MULTI-SUPPLEMENT «MENTUM®»

Кravchenko E.V., Demid D. I., Kvasiuk A. A., Mashko E.V.,  Fatykhava S. А.,

Shabunya P. S., Petrov P.T.

 

State Research and Innovation Centre «Institute of Pharmacology and Biochemistry

 of the National Academy of Sciences of Belarus»

Methods have been developed to determine the quality of a multicomponent dietary supplement "Mentum" using absorption spectrophotometryspectrophotometry and TLC. The assessment of capsules of dietary supplement "Mentum" by indices "The presence of valeric acid," "The presence of flavonoids," "The amount of hydroxycinnamic acids in terms of rosemarinic acid," "The amount of flavonoids in terms of rutin," has confirmed that the quality of this pharmaceutical product meets the requirements of technical documentation.